實驗材料:
基礎培養基(液體或干粉) PET/PETG方形試劑瓶[NEST]
血清(常規為FBS/NBS) 補充劑
移液槍 電動移液槍
15mL、50mL無菌離心管[NEST] 滅菌超純水
盒裝無菌吸頭[NEST] 血清移液管[NEST]
超凈工作臺 雙抗(青鏈霉素混合液)
杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST] 針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]
實驗準備:
血清準備:
配置培養基前一天,將所需血清從-20℃冰庫取出,放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲存,使用前37℃水浴加熱。
培養基準備:
液體基礎培養基使用前37℃水浴加熱。
實驗流程:
基礎培養基配置(干粉):
根據配置體積,選擇合適的滅菌后容器,在容器中倒入約90%體積的超純水,將培養基干粉全部倒入該容器中,用少量超純水將袋內殘留粉末洗出。
攪拌30min使所有成分完全溶解,待溶液澄清后,根據說明書加入適當量的碳酸氫鈉(分析純),繼續攪拌5-10min至溶解,隨后超純水定容并調節PH值。(過濾會使培養基PH值稍微偏高,所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調整PH值至7.20-7.30)
使用0.22μm杯式濾器[NEST]或0.22μm針式濾器[NEST]過濾除菌,并按照日常使用規格分裝入PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中,2-8℃條件下避光保存備用。【菌檢合格后方可使用】
培養基配置:
若含有補充劑,用1000μL無菌吸頭[NEST]取出適量預熱完成的基礎培養基,注入補充劑西林瓶中,將其充分溶解,再將含有補充劑的培養基轉移入基礎培養基中。
接著按照血清使用比例,用血清移液管[NEST]吸取適量預熱完成的血清,注入基礎培養基中,蓋上瓶蓋充分混勻。
雙抗加入:
除了特殊篩選系統外,一般正常培養狀態下,培養基中不添加任何抗生素。若為防止細菌、真菌污染,或懷疑細胞污染需要清除細菌,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。
培養基保存:
將配置后的完全培養基2-8℃條件下,避光保存備用;或按照使用需求分裝入對應規格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中。隔夜或1-2天后觀察完全培養基,溶液澄清通透且無染菌,方可使用。
使用多余的血清,按照剩余量,可分裝入15mL/50mL的無菌離心管[NEST]中(防止血清凍存后膨脹泄露問題,離心管工作體積建議為80%),亦可分裝入合適規格的PET/PETG方形試劑瓶[NEST]中,并用封口膜封口,-20℃條件下避光保存。
使用到的NEST產品:
15mL、50mL無菌離心管[NEST] PET/PETG方形試劑瓶[NEST]
杯式濾器(0.22μm PES膜) [NEST] 針式濾器 (0.22μm PES膜) [NEST]